Fluorescencja In Situ Hybridization
Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH) jest jedną z kilku technik stosowanych do przeszukiwania DNA komórek, szukając obecności lub nieobecności określonych genów lub części genów.
Wiele różnych typów nowotworów wiąże się ze znanymi nieprawidłowościami genetycznymi. A genetycznie, nie mówimy tylko o dziedziczności. Przez całe życie komórki mogą popełniać błędy, kiedy dzielą się i rosną.
Mutacje w DNA, które są związane z rakiem mogą gromadzić się w tych komórkach.
Jak działa FISH?
FISH to technika wykorzystująca sondy fluorescencyjne do wykrywania określonych genów lub części genów (sekwencji DNA). Personel laboratorium medycznego i onkolodzy używają FISH do oceny pacjentów, którzy mogą mieć raka, a czasami do monitorowania pacjenta, u którego zdiagnozowano już raka i leczono go.
FISH można wykonać przy użyciu różnych rodzajów próbek w zależności od lokalizacji i rodzaju podejrzanego raka: komórki nowotworowe uzyskane z krwi obwodowej, z biopsji szpiku kostnego lub biopsji węzłów chłonnych, oraz z utrwalonej formaliną tkanki parafinowej (dotyczy to próbka tkanki, która jest przetwarzana w laboratorium i osadzona w rodzaju wosku, co czyni ją bardziej sztywną, tak, że można ją pokroić w cienkie sekcje i zamontować do oglądania pod mikroskopem).
Co oznaczają litery?
"H" w FISH odnosi się do hybrydyzacji.
W hybrydyzacji molekularnej jako sonda używa się wyznakowanej sekwencji DNA lub RNA - wizualizuj czerwoną klocek Lego, jeśli wolisz. Sonda jest używana do znalezienia odpowiednika klocka Lego lub sekwencji DNA w próbce biologicznej.
DNA w twoim okazie jest jak stosy klocków Lego, a większość klocków w tych stosach nie pasuje do naszej czerwonej sondy.
A wszystkie twoje cegły są starannie ułożone w 23 pary stosów cegieł - każdy stos jest jednym z twoich sparowanych chromosomów homologicznych, mniej więcej. W przeciwieństwie do klocków Lego, nasza czerwona sonda Lego jest jak silny magnes i znajduje swój odpowiednik bez konieczności sortowania przez stosy.
"F" odnosi się do fluorescencji. Nasza czerwona sonda może zgubić się w stosach cegieł, więc jest oznaczona kolorowym barwnikiem fluorescencyjnym, aby się świeciła. Kiedy znajdzie się wśród 23 sparowanych stosów, znacznik fluorescencyjny pokazuje jego położenie. Teraz możesz zobaczyć, w jaki sposób naukowcy i klinicyści mogą używać FISH, aby pomóc określić, gdzie (który stos lub który chromosom) znajduje się konkretny gen dla danej osoby.
"Ja" i "S" oznaczają in situ . Odnosi się to do faktu, że nasza czerwona klocek Lego szuka swojego dopasowania w podanej przez ciebie próbce .
Co z określonymi rakami krwi?
FISH i inne procedury hybrydyzacji in situ są stosowane do diagnozy różnych nieprawidłowości chromosomów - zmian w materiale genetycznym, zmian w chromosomach, w tym:
Deletion - zniknęła część chromosomu
Translokacja - część jednego chromosomu odrywa się i przywiera do innego chromosomu
Inwersja - część chromosomu odrywa się i ponownie wkłada, ale w odwrotnej kolejności
Duplikacja - część chromosomu jest obecna w zbyt wielu kopiach w komórce
Każdy rodzaj nowotworu może mieć swój własny zestaw zmian chromosomowych i odpowiednich sond. FISH nie tylko pomaga zidentyfikować początkowe zmiany genetyczne w procesie chorobowym, takim jak rak, ale może również służyć do monitorowania odpowiedzi na leczenie i remisję choroby.
Zmiany genetyczne wykryte przez FISH czasami dostarczają dodatkowych informacji o tym, jak zachowuje się rak osobnika, w oparciu o to, co zaobserwowano w przeszłości u osób z tym samym rodzajem raka i podobnych zmian genetycznych. Czasami stosuje się FISH po postawieniu diagnozy, aby uzyskać dodatkowe informacje, które mogą pomóc w przewidywaniu wyniku leczenia lub najlepszego leczenia.
FISH może identyfikować nieprawidłowości chromosomalne w białaczce , w tym w przewlekłej białaczce limfocytowej (CLL). W przypadku przewlekłej białaczki limfatycznej / małego chłoniaka limfatycznego FISH umożliwia pacjentom określenie ich kategorii prognostycznej: dobra, średnia lub słaba. W ostrej białaczce limfoblastycznej (ALL) genetyka komórek białaczkowych może informować o poziomie ryzyka raka i pomagać w podejmowaniu decyzji terapeutycznych.
Panele FISH są również dostępne dla chłoniaka, szpiczaka mnogiego, zaburzeń proliferacyjnych komórek plazmatycznych i zespołu mielodysplastycznego. W przypadku chłoniaka z komórek płaszcza na przykład występuje translokacja, którą FISH może wykryć zwaną GH / CCND1 t (11; 14), która jest często związana z tym chłoniakiem.
Dlaczego FISH?
Zaletą FISH jest to, że nie trzeba jej wykonywać na komórkach, które aktywnie dzielą. Testy cytogenetyczne zwykle trwają około trzech tygodni, ponieważ komórki nowotworowe muszą rosnąć w naczyniach laboratoryjnych przez około 2 tygodnie, zanim zostaną przetestowane. Natomiast wyniki FISH są zwykle dostępne w laboratorium w ciągu kilku dni.
> Źródła:
> Testy cytogenetyczne kodu nowotworów CPT.
> Fluorescencja In Situ Hybridization (FISH). http://www.genome.gov/10000206#al-2.
> Fluorescencja In Situ Hybridization (FISH). http://www.nature.com/scitable/topicpage/fluorescence-in-situ-hybridization-fish-327.
> Wolff DJ, Bagg A, Cooley LD, et al. Wytyczne dotyczące badania fluorescencji in situ w hybrydyzacji w chorobach hematologicznych. The Journal of Molecular Diagnostics: JMD. 2007; 9 (2): 134-143.